遇到“黑胶虫”污染怎么办？细胞房如何解决黑胶虫污染问题？

关键词：细胞培养 黑胶虫污染 细菌污染 真菌污染 支原体污染 细胞室灭菌 细胞房污染 细胞房消毒服务 细胞房污染了怎么办

细胞培养中常见的污染类型有细菌污染、真菌污染和支原体污染等。细菌在普通倒置显微镜下呈黑色细沙状。细菌污染细胞后，细胞培养基会浑浊变黄，细胞增殖受到抑制。真菌在普通倒置显微镜下呈丝状，有些真菌在生长初期很像细胞碎片，呈珊瑚状，随后会长出黑色细长丝状物。真菌污染细胞后，细胞培养基清亮，无颜色变化，细胞增殖受到抑制。支原体是牛血清中常见的微生物之一，可通过0.22μm的滤膜，普通倒置显微镜下难以看清形态结构，易被忽视。支原体污染细胞后，细胞培养基会变浑浊，细胞增殖受到抑制，并且细胞容易脱落。

除了上述几种成分明确的细胞污染之外，细胞培养过程中还存在一种很常见，成分却不明确，争议较大的污染类型：俗称“黑胶虫”污染，国外称之为“纳米细菌”污染。“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。“黑胶虫”在普通倒置显微镜的低倍镜下通常为黑色点状或碎片状；在高倍镜下，这些黑色颗粒在原地进行“布朗运动”，细胞培养基并不浑浊。一般情况下，细胞数量与“黑胶虫”数量呈负相关，即细胞越少，“黑胶虫”越多；细胞越多，“黑胶虫”越少。。细胞培养技术是生物医学研究方法中常用的技术，通过细胞培养既能够研究细胞的信号转导、增殖、分化和凋亡，又能够用于药物筛选，以及生产单抗、细胞因子等生物制品。细胞状态的好坏受到多重因素影响，其中无菌、无毒是细胞体外培养的首要条件。

“黑胶虫”污染是一个国内实验室广泛存在和影响巨大的问题。“黑胶虫”为短波单胞菌属的新种，该类菌属的菌种均为需氧非发酵革兰氏阴性杆菌，在环境中普遍存在。短波单胞菌不仅是环境污染物，而且具有致病性，其中Brevundimonasvesicularis和Brevundimonasdiminuta是短波单胞菌属最常见的两种感染致病菌，能够感染人类组织和器官而致病，如菌血症、肺炎和心内膜炎等。因此我们在生活和工作中应尽量避免与该类菌直接接触，一旦感染应及时就医，以防病情加重。

在细胞培养实验中，人们遇到的胶虫并不都是一样的，有像细菌的、有像支原体的、有像原虫的、有像真菌的，还有像细胞碎片的。在国内个实验室的器材条件参差不齐，而且实验人员的操作质量也不尽相同，同一种现象也可能有些许差异，当用描述出来的现象的差异可能变大也可能变小。所以很多人看到细胞被细菌污染了，不好处理，而却描述出来的现象和流传的黑胶虫类似，就会把培养失败的原因归结到无法处理的胶虫污染，甚至可能说它发现的是真正的黑胶虫。这样的事情多了，黑胶虫就会人为的变种，像什么的都有。黑胶虫是否存在，还有待于科学的发展。但有一点可以肯定的，大部分人发现的“胶虫”并不是真正那个未知的胶虫，而是不很常见的细菌、真菌、原虫等微生物污染。

如何避免或应对“黑胶虫”污染？

采用原装进口特级胎牛血清。

出现问题的培养体系中的血清，有很多是经过热灭活处理的，热灭活操作会使血清中产生线状的蛋白质聚合体，因其颗粒较小进行布朗运动便被认定为是生物，所以在进行血清融化的过程中要进行梯度处理，最好在4℃缓慢融化。

如果遇到“黑胶虫”污染怎么办？

换优质胎牛血清。

停止热灭活处理血清，目前大部分高品质血清都不需要热灭活操作，甚至通常因为较高温度处理后，血清质量受影响，细胞生长速率降低。同时热灭活过的血清，蛋白等沉淀物的形成显著增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染。所以在不是做免疫学研究或昆虫细胞培养等特殊场景时，血清尽量不经热灭活。

虽说是“黑胶虫”，但是其实有很大可能性是被其他微生物污染，如果对细胞状态影响很大，正常情况下应该直接丢弃，若细胞非常珍贵，可以用伯氨奎、磺胺、四环素、贝尼尔，庆大霉素进行洗涤。并尽早更换品质好的一次性细胞培养耗材以及相关培养试剂。

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欧菲姆KV-BOX便携式灭菌仪适用于隔离器、生物安全柜、培养箱，是一款有着多级雾化造就气体般的出雾水平，不凝液、单掌可托、性价比高的专用智能消毒机。

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比林科汉过氧化氢干雾灭菌器，自身符合洁净区净化要求，不带入任何外源污染，同时高效根除洁净室空间微生物，达到无菌净化的目标。先进的雾化技术，可将支原体清除剂进行雾化，雾化颗粒小于3微米，增效了空间扩散均匀性，迅速将消毒液弥漫充满整个密闭空间不放过每一处死角，高效去除支原体污染，灭菌效果堪称空前绝后，其均匀性、无残留很适合细胞房环境消毒及培养箱里面消毒，作用时间迅速，整个过程耗时短。

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