细胞培养中微生物污染种类、途径及控制方案 北上广深上门消杀
但凡混入细胞培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染。一般分为：
微生物污染：真菌、细菌、支原体和病毒；
细胞间交叉污染：非同种的其它细胞；
化学污染：影响细胞生存的非细胞所需的化学成分。
微生物污染及检测
容易发现的生物污染：细菌、真菌污染。
不容易被发现的生物污染：病毒、支原体和其它细胞系的污染。
细菌污染
- 无抗生素污染易被发现，抗生素存在易造成隐性污染
- 培养液pH值改变，溶液变浑浊
- 细菌增值迅速，消耗大量营养，产生毒素抑制细胞生长，并导致细胞崩解死亡。
病毒污染
- 最难发现和清除
- 严格的宿主性
- 自限性
- 对实验人员是一个潜在的危险因素
支原体污染（"杂草"）
- 污染严重
- 难发现 难去除
- - 显微镜看不到
- - 不引起培养液浑浊和PH改变
- - 营养要求高不容易用传统的微生物培养法检测到
- - 不能通过过滤清除
- - 大多数抗生素对其无效
真菌污染
- 真菌的种类很多，污染培养细胞的多为毛霉菌、孢子霉、白念珠菌，酵母菌等，很容易通过孢子传播。
- 霉菌污染后多数在培养液中形成肉眼可见的白色或浅黄色漂浮物，短期内培养液不浑浊。
- 显微镜下观察可见在细胞之间有纵横交错穿行的丝状、管状及树状菌丝。
- 常规抗生素、紫外线和酒精灭菌对真菌的作用有限，效果较差。
- 真菌污染大部分是人带进去的。
-
细胞系交叉污染
- 难于发现
- 若出现传代细胞的生长速度异常，考虑交叉污染
- 同一时间只传同一种细胞
- 每种细胞要有单独的培养液
- 建立细胞库，每三个月更换一次细胞
二、微生物污染的途径
1）、空气
空气是微生物传播的最主要途径
一般培养室环境中含菌数应小于1~5个/m3!
2）、器材及培养液
各种培养器皿及培养液灭菌不彻底CO,培养箱没有定期消毒
3）、实验操作问题
- 实验操作无菌观念不强、动作不准确
- 使用污染的器械
- 封瓶时不严
4）、血清
有些血清在生产时就已被支原体或病毒等污染
三、微生物污染对细胞的影响
体外培养的细胞自身没有抵抗污染的能力，而且培养基中加入的抗生素抗污染能力很有限，故细胞一旦发生污染多数无法挽救!
轻者:细胞生长缓慢，变得粗糙，轮廓增强，胞质出现较多的颗粒状物质。用这类带菌状态的细胞做实验，可能会影响实验结果的真实性。
重者:细胞停止生长，大面积脱壁，崩解、死亡，直接导致实验失败。
四、微生物污染的防治
树立“预防为主”的思想
良好的无菌操作、合理利用抗生素、建立细胞库、良好的规章制度、保持工作区清洁、细胞污染的检测
良好的无菌操作
所有玻璃器皿和培养液与试剂的配制应严格无菌避免溢出、溅出和气溶胶;吸入或吸出液体时避免倾倒吸入或吸出液体时，不要触碰细胞培养瓶的瓶口;
液体应分装并置4~8 ℃保存:
每种细胞应使用单独的培养液:
切记细胞培养时应避免交谈：
- 实验前制定好实验计划和操作程序，备齐各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内避免开始实验后，因物品不全往返拿取而增加污染机会；
- 超净工作台面上用品不要过多或重看放置，否则会遮挡射线降低消毒效果;
- 一些操作用具如移液器、废液缸、试管等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒;
合理利用抗生素
- 过度依赖抗生素会使人们忽略无菌操作
- 滥用抗生素常导致耐药菌的产生
- 牢记抗生素不能代替无菌操作
建立细胞库
- 减少购买细胞所用的各种费用
- 冻存的细胞生物性状不发生改变
- 消除了隐蔽污染的潜在危害
良好的规章制度
- 只有相关人员才可进入细胞培养区
- 细胞培养区必须和其他区域分开
- 每个细胞培养区应布局合理，保证所需物品就近放置在处理细胞时避免不必要的走动
- 细胞培养区应避免使用水池，从而避免微生物污染
保持工作区清洁
- 定期对地面和台面进行清洗和消毒
- CO,孵箱
- 每2~3个月消毒清洗孵箱
- 所有溅出或溢出的液滴应立即擦拭并消毒
- 每周孵箱内水盘需彻底消毒清洗
- 及时清理废弃物，易感染材料
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