PCR实验室污染主要源自四个方面：

（一）标本间交叉污染：这主要源于收集容器的污染、标本放置不当导致的溢出或粘附，以及微生物标本（特别是病毒）通过气溶胶形成和扩散所引发的相互污染。此外，在核酸模板提取过程中，吸样枪的污染也可能导致标本间的交叉污染。

（二）PCR试剂的污染：这种污染通常发生在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其他溶液被PCR核酸模板污染所致。

（三）PCR扩增产物污染：这是PCR反应中最常见且主要的污染问题。由于PCR产物拷贝量极大（通常达到10^13拷贝/ml），极微量的产物污染就足以导致假阳性结果。此外，气溶胶污染也是一个常被忽视但极为重要的污染源，其在操作过程中的剧烈摇动、开盖、吸样等动作中容易形成，并且一个气溶胶颗粒可能携带高达48000拷贝的DNA，因此必须给予高度重视。

（四）实验室中克隆质粒的污染：在分子生物学实验室及某些使用克隆质粒作为阳性对照的检验室中，这一问题较为普遍。由于克隆质粒在单位容积内含量高，且在纯化过程中需使用大量用具和试剂，加之活细胞内质粒的繁殖能力强，因此其污染的可能性也相对较大。

污染监测与防控

一个优秀的实验室应时刻关注污染监测，分析污染原因，并采取相应措施防止和消除污染。以下是一些有效的监测和防控方法：

对照试验

1. 阳性对照：用于验证PCR反应的成功与否，产物条带的位置及大小是否符合预期。阳性对照应选择扩增度适中、重复性好的标本，如重组质粒，但其含量不宜过高以减少污染风险。
2. 阴性对照：每次PCR实验都必须进行阴性对照试验，包括使用正常血清或相应组织细胞作为标本对照，以及在PCR试剂中不加模板DNA或RNA进行扩增以监测试剂污染。
3. 重复性试验：通过多次重复实验来验证结果的稳定性和可靠性。
4. 选择不同区域的引物进行PCR扩增：以检测引物的特异性和扩增效率。

防止污染的方法

在进行PCR操作时，操作人员应严格遵守操作规程，以最大程度地降低PCR污染风险：

（一）划分操作区：尽管普通PCR尚无法实现单人单管完全闭管操作，但仍需在三个不同区域内进行实验操作：试剂准备区、标本制备区以及PCR扩增区及分析区。各区域应保持一定隔离，使用专用器材，并遵循特定的操作方向。

（二）分装试剂：PCR扩增所需试剂应在生物安全柜、装有紫外灯的超净工作台或负压工作台中配制和分装。所有加样器和吸头应固定放置于其中，避免用于吸取扩增后的DNA或其他来源的DNA。此外，PCR用水应为高压双蒸水，引物和dNTP也应在无PCR扩增产物区配制并分装储存。

针对固体表面的核酸残留，很多实验室采用75%乙醇或84消毒液等进行擦拭处理，但这种方式腐蚀性大、刺激性大、排残时间长。

美国疾控中心给出的指导意见是采用核酸试剂处理固体表面。针对空气中的气溶胶污染，国内不少疾控实验室则选择润联旗下的核酸清除方案：比林科汉核酸清除仪+诺沃赛德核酸清除剂，核酸实验室中的生物安全柜则采用欧菲姆KVBOX核酸清除仪。

自新冠疫情后，润联针对实验室核酸污染，研发出小型便携智能且干雾效果极佳的核酸污染清除产品，同时，引进了源自欧盟的诺沃赛德核酸清除剂，最终推出的核酸污染解决方案已在全国几十家行业龙头单位及企业进行试行，其中包括疾控中心、体外诊断试剂企业、市级医院检验科等，取得了老师们的一致认可。

DNA去除剂往往含有潜在腐蚀性危险的化学成分，包含叠氮化合物、矿物质酸如磷酸、盐酸、刺激性强的过氧乙酸，碱性物质如氢氧化钠等。润联旗下的诺沃赛德DNA污染去除液则表现完美，没有对金属板产生任何损伤。对实验室其他类型的仪器表面也进行了腐蚀性检测，不会对塑料、橡胶等仪器的表面产生任何损伤。

润联推出的诺沃赛德气溶胶去除剂NOVOCIDE AIR配合比林科汉核酸气溶胶去除仪，起到了1+1＞2的效果，该方案已经在疾控实验室得到了老师的充分认可。

润联可提供有效解决实验室核酸气溶胶污染问题的产品及方案，适用于疾病控制中心、微生物实验室、动物房实验室、PCR实验室、分子实验室、P3及P4等实验室。详询润联张工18938962967微信同号

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